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绣球菌多糖提取方法的比较研究

[导读]​绣球菌多糖存在于其菌丝体和子实体中,但因绣球菌子实体生长缓慢,人工栽培周期太长,采用液体深层发酵法培养,周期短、成本低,能大大提高多糖的产量。因此上海亚荣生化仪器厂针对绣球菌菌丝体多糖的提取工艺进行了比较研究,为绣球菌多糖开发利用提供科学依据。

方法与步骤

1. 绣球菌的培养

2. 培养基 ( 1) 斜面培养基: PDF 培养基。( 2)液体发酵培养基: 20% 土豆汁、0. 1% 硫酸镁、0. 3% 磷酸二氢钾、2% 的淀粉、0. 3% 的蛋白胨、0. 01% 的复合维生素 B1,pH 5. 5。

3.绣球菌菌丝体的培养与收集 将绣球菌斜面菌块接种于液体发酵培养基中,25℃培养至菌丝球长满为止,5 000r/min 离心,将菌丝体收集,存 4℃ 冰箱保存备用。

2. 绣球菌多糖的提取

1. 热浸法 准确称取菌丝体 10g 于锥形瓶中,加 水 100mL,振荡混匀,然后 85℃水浴 1h,5 000r/min 离 15min,将残渣再次加入100mL 的水,振荡混匀,85℃水浴 1h,二次浸提,将浸提液合并到一起,旋转蒸发器减压浓缩,取浓缩液,氯仿: 正丁醇 = 4∶1 等体积加入,混匀后,10 000r/min 离心 15min,去除杂蛋白。取上清液,加入 80% 的无水乙醇,醇沉后离心,沉淀部分烘干即多糖。称重并按 1. 3 方法测定多糖含量。

 2.热浸剪切超声法 准确称取菌丝体 10g 于锥形瓶中,加水 100mL,振荡混匀,85℃水浴 1h,再放入高速剪切乳化机中10 000r/min 剪切 10min,最后放入超声波提 取 机 中 超 声 30min ( 超 声 2. 0s,间 隙 2. 0,时 长30min) 取出,5 000r/min 离心 15min,取上清液,旋转蒸发器减压浓缩,取浓缩液,氯仿: 正丁醇 = 4∶1 等体积加入,10 000r/min 离心 15min 去除杂蛋白。取上清液,加入 80% 的无水乙醇醇沉,烘干。称重并按 1. 3 方法测定多糖含量。

RE-6000 旋转蒸发器 ( 上海亚荣生化仪器厂) ; SHB-B95 循 环水 式 多 用 真 空 泵 (郑 州 长 城 科 工 贸 有 限 公 司) ;

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