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通合剂的旋转蒸发提取

[导读]上海亚荣生化仪器厂在下文介绍通合剂的提取所需要的生化仪器以及实验方法。

1 介绍仪器与试药

1. 1 仪器

DZF-6050真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);循环式多用真空泵(上海亚荣生化仪器厂SHZ-III);恒温水浴锅( 北京长安科学仪器厂) ;RE-52CS型旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器厂) ; QC2030型超声清洗器( 天津市旗美科技有限公司) ; DP-01 隔膜真空泵( 天津市东康科技有限公司) ; 800型离心沉淀器( 上海手术器械厂) ;高效液相色谱仪( 2910 泵, 2930UV检测器,N2000工作站,上海天普精密科学仪器有限公司) ,C18色谱柱( 5μm,250×4.6mm,江苏汉邦科技有限公司) 微量进样器(100μL,上海安亭微量进样器厂) 。

1. 2 试药

甲醇、乙腈( 色谱级,天津市大茂化学试剂厂) ; 灭菌注射用水( 四川科伦药业股份有限公司) 。黄芪、川芎、丹参、当归、川牛膝、地龙、水蛭、桂枝、葛根、生地、麦冬、石菖蒲、茯苓、远志、大黄、甘草等药材( 均购于康正医药有限公司,按《中国药典》2010版一部检验为合格药材) 。凝血酶( 北京普博欣生物科技有限责任公司,批号: PB12088, 200μ) ; 纤维蛋白原( 中国药品生物制品检定所,批号: 20140203) ; 阿魏酸( 中国药品生物制品检定所,批号: 20131215) ; 其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

由以上药材鉴定可知,川芎,当归的主要活性成分为阿魏酸,水蛭提取物的活性为其抗凝血活性,即对以上药物采取水煎煮法,以提取液中阿魏酸含量,抗凝血活性和干浸膏得率3个参数的综合评价为提取工艺的考察标准。

2. 1 上海亚荣生化仪器厂介绍提取液中阿魏酸含量的测定

2. 1. 1 色谱条件: 流动相:乙腈-0.085%磷酸水( 17:83);检测波长:316nm;流速1mL/min;柱温:25℃;进样量: 20μL。

2. 1. 2 标准曲线的绘制: 精密称取阿魏酸对照品4.9mg,置50mL量瓶中,加70%溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL,10.0mL,分别置10mL量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,摇匀,照含量测定项下方法测定。并以浓度C( μg /mL)为横坐标,峰面积A为纵坐标,绘制标准曲线,求出线性方程,Y= 5885.6X+3409,R2=0.9982 。线性范围9.8-98μg/mL。

2. 1. 3 供试品制备: 按处方量称取药材提取,并置于上海亚荣RE-52CS旋转蒸发仪中浓缩定容至1000mL量瓶中。

2. 1. 4 阿魏酸含量的测定: 将供试品测得的峰面积A代入线性方程,算出阿魏酸含量。

2. 2 利用上海亚荣RE-52CS旋转蒸发仪对提取液中抗凝血活性的测定

按照正交试验设定的因素水平称取药材提取,合并提取液,滤过,置于旋转蒸发仪中浓缩,冷去至室温,加入乙醇( 慢加快搅) ,使含醇量达70%,静置24h,滤过,滤液回收乙醇,置于旋转蒸发仪中浓缩,干燥,取相当于1g水蛭药材的浸膏,精密称定,精密加入0.9%NaCl溶液5mL,充分搅拌,浸提30min,离心,取上清液250μL于1mL容量瓶,加0. 9%NaCl溶液稀释至刻度,摇匀,静置。取稀释液100μL,置试管,加入0.5%纤维蛋白原( 以凝固物计) 的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液( 临用配制,0.2mol /L 三羟甲基氨基甲烷25mL 与0.1mol /L 盐酸溶液约40mL,加水至100mL,调节pH 值至7.4)200μL,摇匀,置37℃温浸5min,缓缓滴加每1mL中含10单位的凝血酶溶液( 每4min滴加1次,每次2μL,边滴加边摇匀) 至凝固,记录消耗的凝血酶溶液的体积,计算其抗凝血酶活性成分。

本试验采用了降低待测液与凝血酶溶液的浓度方法,可以更有效更精确地测定出其抗凝血成分的活性。


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